Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患儿进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次注意到去甲自身病原基底到注意到1同型乳癌外科呕吐的成果不下在成人时期就有很好的描绘出，多个去甲自身病原基底非典型的成人中会有70%在血清类比后10月内身患乳癌，而随访15年的成人这一比不下提高到84%。来得之下，占外科1同型乳癌一半以上的同型1同型乳癌的得病前提还很难得不到充分的深入研究。

越来越多的人开始应用于分期系统来定义1同型乳癌的成果：生物基底在注意到多种去甲自身病原基底时进到第1阶段，注意到摄入量诱发时进到第2阶段，注意到呕吐时进到第3阶段。一些多发去甲自身病原基底非典型的生物基底，在1期和2期，成果较太快，并蓬勃发展为得病的1同型乳癌。我们以后描绘出了一分组在首次验证到多种去甲自身病原基底样品后最少10年无乳癌的变太快成果者，这分组高血压比例少，但特征非常明确。随后，我们发现去甲自身上皮细胞依赖性CD8+T细胞内底物在成果极快的高血压中会原则上不普遍存在，但在近期得病和长期普遍存在的乳癌高血压中会很容易验证到。这可能会声称，与成果高血压来得，这些高血压自身免疫底物的适度加强。

早期深入研究声称，尽管适度性T细胞内(Treg)比例正常，但乳癌高血压普遍存在一些新功能缺失，其中会包括对IL-2的底物潜能提高。此外，乳癌高血压中会的波动CD4+T细胞内可能会对适度格外具抵抗性，乏善可陈为波动T细胞内的诱发减太快，自然诱发的Treg和基底外诱发的可借Treg，以及上皮细胞境况的CD4+T细胞内中会IL-2底物减太快。本深入研究的目的是描绘出了CD4+适度性T细胞内(Treg)在一小群极极快成果者中会的特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方式：BOX深入研究是一项以人群蓝本的纵向深入研究，在21岁以下确诊的高血压配偶中会检查1同型乳癌的致命因素。我们以后描绘出了长期极快成果者的特征，他们保证多重去甲自身病原基底非典型超过10年，但很难注意到乳癌的外科呕吐，太快性或非顺利进行性自身免疫。随后，10名继续保证无乳癌并不想给予大量血浆样品的极快成果者纳入T和B细胞内新功能深入研究。在目前的深入研究中会，8名太快成果者(SP分组)，中会位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的去甲自身病原基底非典型。所有的大多数人都位处1同型乳癌成果的1期，尽管一些人随后失去了去甲自身病原基底对某些上皮细胞的橘红色，然而，一名高血压仍未位处2期最少6年，但很难注意到外科呕吐，一名高血压被病症为乳癌，该受试者72岁，在采集实验样品时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在研究小组中会对该丝氨酸顺利进行了单独深入研究报告。裂解外周血单个核分裂细胞内(PBMCs)，采用多数值流式细胞内术和T细胞内诱发飞行测试深入研究报告丝氨酸中会Treg的基频、表同型和新功能。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、并不一定和紧接著)顺利进行无监督聚类深入研究，深入研究报告Treg表同型。

结果：与保健丝氨酸来得，来自太快成果基底的思绪CD4+T细胞内的监督聚类推测，应答的思绪CD4+ Treg基频提高，与糖皮质激素可借的TNFR无关蛋白(GITR)表述提高有关。一名HbA1c升高的高血压与成果极快者和意味着的印证分组来得，Treg谱大致相同。新功能深入研究声称，与保健丝氨酸来得，来自极快成果基底的Treg介导的CD4+波动T细胞内诱发值得注意损伤。乏善可陈为对波动CD4+T细胞内CD25和CD134表述的诱发提高。

布1 全面性的表同型深入研究推测，CD4+Treg非典同型在太快成果表头中会提高。由FlowSOM转化成的Treg室，聚集在来自所有丝氨酸的活CD4+CD45RA -细胞内上。根据上标物表述鉴定出10个元簇:思绪T细胞内_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T细胞内;HLA-DR + GITR +思绪T细胞内;内核分裂Treg_1;内核分裂Treg_2;内核分裂Treg_3;和内核分裂Treg_4。(a)应用于9个不同Treg上标转化成的10个元簇的MST。每个路由器代表一个协同(100个协同)，格外大的元协同(10个元协同)在路由器分组周围手工。每个路由器中会的饼布透露单个上标的表述级别。(b)每个元聚类的热布，以推测整基底上标表述。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)转化成布，以及FlowSOM标识的每个元簇的基岩。(e-l)来得原子量为每个metacluster罐该线布(原子量> 0.05%)确定为HD和SP分组:内核分裂Treg_2 (e),内核分裂Treg_3 (f),内核分裂Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T细胞内(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T细胞内(l)。浅蓝色白点代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于布形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

布2 应用于CITRUS的预测模同型断定，Treg基频的提高是成果极快的logo。分级离子通道(a - f)和柑橘深入研究(g-k)比较SP大多数人和意味着的HD大多数人在CD4+CD45RA−T细胞内上的区别。(a)性状CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群基底的代表性布。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表述顺利进行裂解，建模FlowSOM群基底。(b) HD(黑斑)和SP(蓝点)分组以及丝氨酸SP 606(浅蓝色)中会CD25+ cd127的基频概述布。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+离子通道孙可数的罐该线布;(c) HLA-DRloGITR−(内核分裂Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核分裂Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核分裂Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核分裂T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述高强度着色，箭头值得注意的簇被标识为SP和HD表头之间的不同。(j)罐该线布推测了在SP(蓝点)和HD(灰点)分组中会，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的来得原子量(比不下)。(k)直方布推测每个簇的表同型(粉红色)和Treg上标来得表述与背景表述(深蓝色);上列，内核分裂Treg_3;上头一路上，内核分裂Treg_4。背景与所有其他簇中会上标的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

布3 与保健献血者来得，成果极快者思绪treg的GITR提高。每个思绪CD4+T细胞内元簇(思绪T细胞内_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T细胞内;HLA-DR + GITR +思绪T细胞内;内核分裂Treg_2;内核分裂Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个表述上标的巨大变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)表头的表述热布(sp606不包括在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇中会所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(浅蓝色)的FlowSOM GITR表述串联，推测直方布(c)和概述布(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(浅蓝色)所有丝氨酸包括，p< 0.05(深蓝色)丝氨酸SP 606和意味着的HD不包括在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR表述，从分级离子通道，从所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(浅蓝色)串联，推测直方布(e)和概述布(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

布4 来自极快成果的CD4+ treg细胞内控制波动CD4+T细胞内的潜能提高。SP分组用深蓝色的该线和白点透露，HD分组用金色的该线和白点透露，浅蓝色的该线/白点透露丝氨酸sp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内顺利进行分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被上标为CFSE, Treg按掩蔽的比不下硫酸铜。用抗CD3 /28微珠酪氨酸细胞内，培养3同月顺利进行流式细胞内术验证。(a-d)与CD4+反之亦然者来得应的treg培养(自基底)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者培养。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE诱发倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发倍数。应用于非典型印证(应答的积极响应细胞内不含treg)计算诱发倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

布5 波动CD4+T细胞内对极快成果的T细胞内酪氨酸的诱发格外敏感。SP分组用深蓝色的该线和白点透露，HD分组用金色的该线和白点透露，浅蓝色的该线/白点透露丝氨酸sp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内顺利进行分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel上标，treg按掩蔽的比不下硫酸铜。用抗CD3 /28微珠酪氨酸细胞内，培养3同月顺利进行流式细胞内术(CD25反染)和细胞内因孙子深入研究。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者共同培养。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE诱发百份(b)。(c,d) CD25诱发百份(c)和CD134诱发百份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在上海交通大学中会的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

假设：我们得出的假设是，来自极快成果孙子的酪氨酸思绪CD4+Treg在GITR表述中会得不到了扩充和非常丰富，强调了进一步深入研究Treg在1同型乳癌风险生物基底中会的异质性的必要性。

原文引自：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28