Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中迅速扩展

从第一次用到肾脏自身特异性到用到1DF白血病流行病学征状的重大突破率在青少年末期就有很好的描绘，多个肾脏自身特异性白血病的青少年之中曾70%在血清转换后10年内患上白血病，而随访15年的青少年这一百分比降低到84%。来得之下，占流行病学1DF白血病一半以上的DF1DF白血病的确诊机制还没有得到不够再进一步的学拳法研究。

越来越多的人开始可用分之前系统设计来表述1DF白血病的重大突破：个锥体在用到多种肾脏自身特异性时进入第1之前，用到浓度所致时进入第2之前，用到征状时进入第3之前。一些多发肾脏自身特异性白血病的个锥体，在1期和2期，重大突破较慢，并拓展为确诊的1DF白血病。我们之前描绘了一分组在首次测定到多种肾脏自身特异性检验后至少10年无白血病的较慢重大突破者，这分组患儿000人少，但相似性并不明确。随后，我们发现肾脏自身抗原酪氨酸CD8+T肝细胞质子化在重大突破快速的患儿之中基本不实际上，但在近期确诊和长期实际上的白血病患儿之中很容易测定到。这可能断定，与重大突破患儿来得，这些患儿诱发质子化的通气增强。

以前学拳法研究断定，尽管通气性T肝细胞(Treg)数量但会，但白血病患儿实际上一些功能缺点，其之中仅限于对IL-2的质子化技能增大。此外，白血病患儿之中的震荡CD4+T肝细胞可能对通气不够具抵抗性，平庸为震荡T肝细胞的抑止减弱，其本质产生的Treg和锥体外产生的诱导Treg，以及抗原经历的CD4+T肝细胞之中IL-2质子化减弱。本学拳法研究的用以是描绘了CD4+通气性T肝细胞(Treg)在一小群极快速重大突破者之中的相似性，他们的为数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方式：BOX学拳法研究是一项以老年人为基础的斜向学拳法研究，在21岁以下确诊的患儿亲属之中锥体检1DF白血病的危险因素。我们之前描绘了长期快速重大突破者的相似性，他们保有多重肾脏自身特异性白血病少于10年，但没有用到白血病的流行病学征状，慢性或非受累诱发。随后，10名在此期间保有无白血病并情愿提供者大量血液检验的快速重大突破者纳入T和B肝细胞功能比对。在迄今的学拳法研究之中，8名慢重大突破者(SP分组)，之中位岁数43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的肾脏自身特异性白血病。所有的与会者都处于1DF白血病重大突破的1期，尽管一些人随后无法控制了肾脏自身特异性对某些抗原的白血病质子化，然而，一名患儿并未处于2期至少6年，但没有用到流行病学征状，一名患儿被诊断为白血病，该受试者72岁，在采集实验检验时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据比对之中对该NADP顺利进行了实际上比对报告。除去外周血单个核肝细胞(PBMCs)，采用多给定流式肝细胞拳法和T肝细胞抑止试验比对报告NADP之中Treg的频率、基因DF和功能。可用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和重归)顺利进行无监督聚类比对，比对报告Treg基因DF。

结果：与肥胖症NADP来得，来自慢重大突破锥体的梦境CD4+T肝细胞的监督聚类断定，激活的梦境CD4+ Treg频率降低，与糖皮质激素诱导的TNFR相关复合物(GITR)理解降低有关。一名HbA1c升高的患儿与重大突破快速者和匹配的对照分组来得，Treg谱有所各不相同。功能于数，与肥胖症NADP来得，来自快速重大突破锥体的Treg介导的CD4+震荡T肝细胞抑止明显破损。平庸为对震荡CD4+T肝细胞CD25和CD134理解的抑止降低。

三幅1 深入的基因DF于数，CD4+Treg亚DF在慢重大突破队列之中降低。由FlowSOM填充的Treg室，聚集在来自所有NADP的活CD4+CD45RA -肝细胞上。根据标明物理解鉴定出10个元簇:梦境T肝细胞_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T肝细胞;HLA-DR + GITR +梦境T肝细胞;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)可用9个各不相同Treg标明填充的10个元簇的MST。每个键值代表一个坦克部队(100个坦克部队)，较小的元坦克部队(10个元坦克部队)在键值分组周围上色。每个键值之中的饼三幅问到单个标明的理解级别。(b)每个元聚类的热三幅，以断定整锥体标明理解。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)填充三幅，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)一般来说丰度为每个metacluster木箱线或三幅(丰度> 0.05%)确认为HD和SP分组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T肝细胞(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T肝细胞(l)。深浅蓝色格子代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 可用CITRUS的预测模DF得出结论，Treg频率的降低是重大突破快速的标志。分级离子通道(a - f)和柑橘比对(g-k)比较SP与会者和匹配的HD与会者在CD4+CD45RA−T肝细胞上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群锥体的代表性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR理解顺利进行除去，模拟FlowSOM群锥体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)分组以及NADPSP 606(深浅蓝色)之中CD25+ cd127的频率核心内容三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+离子通道集合的木箱线或三幅;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)棉花簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解强度后处理，箭头引人注用以簇被识别为SP和HD队列错综复杂的各不相同。(j)木箱线或三幅断定了在SP(蓝点)和HD(灰点)分组之中，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的一般来说丰度(百分比)。(k)直方三幅断定每个簇的基因DF(粉红色)和Treg标明一般来说理解与历史背景理解(浅蓝色);上列，缓存Treg_3;下面一路上，缓存Treg_4。历史背景与所有其他簇之中标明的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

三幅3 与肥胖症献血者来得，重大突破快速者梦境treg的GITR降低。每个梦境CD4+T肝细胞元簇(梦境T肝细胞_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T肝细胞;HLA-DR + GITR +梦境T肝细胞;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个理解标明的变异。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的理解热三幅(sp606不仅限于在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇之中所有HD(棕色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(深浅蓝色)的FlowSOM GITR理解串接，断定直方三幅(c)和核心内容三幅(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(深浅蓝色)所有NADP仅限于，p< 0.05(浅蓝色)NADPSP 606和匹配的HD不仅限于在测试之中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之中GITR理解，从分级离子通道，从所有HD(棕色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(深浅蓝色)串接，断定直方三幅(e)和核心内容三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

三幅4 来自快速重大突破的CD4+ treg肝细胞控制震荡CD4+T肝细胞的技能增大。SP分组用浅蓝色的线或和格子问到，HD分组用黑色的线或和格子问到，深浅蓝色的线或/格子问到NADPsp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞顺利进行分选。CD4+CD25−(应答者)被标明为CFSE, Treg按观察的百分比滴定。用抗CD3 /28微珠再造肝细胞，培养出来3天后顺利进行流式肝细胞拳法测定。(a-d)与CD4+应答者一般来说应的treg培养出来(自锥体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应答者培养出来。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE抑止百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止百分比。可用白血病对照(激活的组织起来肝细胞不含treg)计算抑止百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

三幅5 震荡CD4+T肝细胞对快速重大突破的T肝细胞再造的抑止不够敏感。SP分组用浅蓝色的线或和格子问到，HD分组用黑色的线或和格子问到，深浅蓝色的线或/格子问到NADPsp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞顺利进行分选。CD4+CD25−(应答者)被cfsel标明，treg按观察的百分比滴定。用抗CD3 /28微珠再造肝细胞，培养出来3天后顺利进行流式肝细胞拳法(CD25反染)和肝细胞因子比对。HD Treg与HD、SP或sp606应答者共同培养出来。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE抑止次之(b)。(c,d) CD25抑止次之(c)和CD134抑止次之(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养出来之中的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

假设：我们证明了的假设是，来自快速重大突破子的再造梦境CD4+Treg在GITR理解之中得到了适配和丰富，忽略了再进一步学拳法研究Treg在1DF白血病几率个锥体之中的差异性的重要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28